ATCC細胞實驗步驟與使用方法

ATCC細胞實驗步驟：

1、RNA的提取;

2、反轉錄合成cDNA;

3、PCR擴增;

4、產(chǎn)物的電泳和結果的測定。

ATCC細胞使用方法：

1、細胞傳代：

細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的85%及以上面積時，收集瓶內(nèi)液體于15ml離心管中，1000rpm離5min，棄上清，用12ml完全培養(yǎng)基重懸細胞，按1:2的比例進行接種傳代，接種到25cm2培養(yǎng)瓶中，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，2-3天更換培養(yǎng)液。換液的步驟同細胞 NK-92細胞，ATCC細胞，培養(yǎng)技術傳代步驟。

2、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的85%及以上面積時，收集瓶內(nèi)液體于15ml離心管中，1000rpm離心5min，棄上清，用適當量的凍存液（基礎培養(yǎng)基：FBS：DMSO=5:4:1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

2）先將細胞凍存管放置于4℃ 0.5h，再放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃隔夜，24h后可轉入液氮中進行長期保存。

3、細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具）， 快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至含有5ml完全培養(yǎng)液的15ml離心管中，然后1000rpm/min，離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用6ml完全培養(yǎng)基重懸，接種到培養(yǎng)瓶中，后放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。