步法核酸標(biāo)記Lable IT試劑盒介紹及應(yīng)用

哈嘍，艾瑞巴蒂！今天小編本著好物需要分享，來給大家介紹一款我們轉(zhuǎn)染最佳拍檔——一步法核酸標(biāo)記Lable IT。不需要構(gòu)建熒光表達(dá)載體就可監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)染效率，也可進(jìn)行體內(nèi)體外示蹤，是不是很方便。
 

Label IT®核酸標(biāo)記試劑盒為不同核酸類型提供高效、一步到位的直接標(biāo)記。采用非酶標(biāo)記方法和非破壞性的方式將標(biāo)記共價(jià)附著到核酸上，不會(huì)改變核酸的結(jié)構(gòu)或影響下游雜交性能，下游可以直接進(jìn)行體外體內(nèi)示蹤、生物素檢測(cè)、活細(xì)胞定位等。

一、標(biāo)記原理及步驟

Label IT®標(biāo)記試劑包含一種反應(yīng)性烷基化試劑，該試劑具有通過靜電相互作用促進(jìn)的強(qiáng)核酸結(jié)合能力。將RNA或DNA與Lable IT 在37℃混合孵育1h后純化即可獲得標(biāo)記完成的核酸，即可進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。

圖.Labie IT 原理及實(shí)驗(yàn)步驟

Label IT®化學(xué)標(biāo)記試劑組成：

綠色區(qū)域：標(biāo)記（熒光團(tuán)或半抗原）

黃色區(qū)域：促進(jìn)與核酸靜電相互作用的接頭

藍(lán)色區(qū)域：反應(yīng)性的烷基化基團(tuán)

二、產(chǎn)品特點(diǎn)

無損標(biāo)記任何DNA或RNA模板，應(yīng)用廣泛

圖1、核酸的無損直接標(biāo)記。小鼠總RNA用Label IT®Cy®3（B）電泳標(biāo)記，并在Agilent RNA 6000 Nano芯片上與未標(biāo)記的總RNA（A）一起分析。標(biāo)記和未標(biāo)記樣品的RNA完整性數(shù)（RIN）約為9.0。

操作簡(jiǎn)單快速，僅需一個(gè)反應(yīng)步驟

可調(diào)標(biāo)記密度–通過最佳標(biāo)記的DNA和RNA實(shí)現(xiàn)高靈敏度

圖2、靈活的標(biāo)記反應(yīng)條件。通過調(diào)整反應(yīng)中Label IT®試劑（Mirus Bio）的量或在37°C下調(diào)整標(biāo)記反應(yīng)的培養(yǎng)時(shí)間，可以輕松控制標(biāo)記密度。

化學(xué)標(biāo)記減少了酶標(biāo)整合和復(fù)制偏好

成本低，與核酸酶法標(biāo)記相比，每個(gè)反應(yīng)可節(jié)省50%的費(fèi)用

三、如何選擇標(biāo)記試劑盒

Lable IT 系列產(chǎn)品除了通用Lable IT核酸標(biāo)記試劑盒外，還有優(yōu)化的標(biāo)記試劑盒：Label IT® TRACKER™，用于不同類型核酸標(biāo)記。以及Lable IT®核酸修飾試劑盒，主要利用胺官能團(tuán)修飾DNA或RNA。

圖3、標(biāo)記試劑盒種類

四、Lable IT 系列應(yīng)用案例

圖4、標(biāo)記質(zhì)粒DNA的遞送及YFP報(bào)告基因表達(dá)。使用Label IT®核酸標(biāo)記試劑盒CX羅丹明（Mirus Bio）標(biāo)記的TransIT®-LT1（Mirus生物）和EYFP Nuc質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞的共聚焦熒光顯微鏡。圖像顯示轉(zhuǎn)染羅丹明標(biāo)記的質(zhì)粒DNA（紅色）和EYFP表達(dá)（黃色）8小時(shí)后的COS-7細(xì)胞。

圖5。質(zhì)粒定位和表達(dá)的間接示蹤。使用TransIT®-LT1（Mirus Bio）將Label IT®Tracker -Cy®5（Mirus生物）標(biāo)記的pEYFP nuc質(zhì)粒（藍(lán)色）轉(zhuǎn)染進(jìn)在完全培養(yǎng)的COS-7細(xì)胞™中。在轉(zhuǎn)染后3、8和20小時(shí)采集圖像。藍(lán)色信號(hào)表示Cy®5標(biāo)記質(zhì)粒的細(xì)胞定位，綠色信號(hào)表示細(xì)胞自發(fā)熒光，黃色信號(hào)表示核黃色熒光蛋白（YFP）報(bào)告子的表達(dá)。使用共焦顯微鏡獲取圖像。
 

圖6、 C6細(xì)胞中的siRNA追蹤。將C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞接種在6孔板中的聚-D-賴氨酸涂層蓋玻片上并孵育過夜。將8µl TransIT -TKO®轉(zhuǎn)染試劑稀釋在200µl無血清培養(yǎng)基和50 nM（孔中的最終濃度）Label IT®siRNA Tracker CyTM3標(biāo)記的siRNA雙鏈體添加到稀釋的TransIT -TKO®轉(zhuǎn)染試劑中以形成復(fù)合物。隨后，將這些復(fù)合物添加到完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的45%融合的C6細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染后20小時(shí)在Zeiss LSM 510共焦顯微鏡上獲得共焦圖像。