CBA法多因子檢測試劑盒的原理、使用方法及應用

雖然液相蛋白定量檢測的技術(shù)很多，但是大多數(shù)的技術(shù)僅能對樣本進行單一指標的檢測，同時檢測多個指標時則需要提供大量的樣本分批檢測，操作繁瑣，且各指標間差異性較大。對于樣本量較少或需要對比各指標的用戶，傳統(tǒng)的技術(shù)無法滿足需要。再者日常實驗中，常需對溶液體系中的可溶性蛋白進行定量檢測，如細胞培養(yǎng)上清或血清中的細胞因子含量的定量分析，由于這些因子的含量較少，低于一般常規(guī)方法的檢測下限，使用常規(guī)的蛋白檢測方法Western Blot等很難檢測。愛必信提供CBA法多因子檢測試劑盒，提供了更加靈活、簡便、高效的微量樣本多重檢測方案。

原理：
將特定的抗體偶聯(lián)到特定的具有不同熒光強度的微球表面，制備成為待測因子的捕獲微球（Capture Antibody）。將捕獲微球與待測樣本（血清、血漿或者細胞培養(yǎng)液）進行孵育，此時待測的細胞因子被特定的微球捕獲。生物素標記的檢測抗體，形成抗體包被微球-細胞因子-檢測抗體的免疫復合物，加入藻紅蛋白標記的鏈霉親和素與生物素結(jié)合，通過流式細胞儀檢測，獲得待測物的熒光強度，熒光強度與樣本中因子的含量成正比，最后結(jié)合這十二種細胞因子標準品的標準曲線，從而實現(xiàn)對同一份樣本中多個因子的定量檢測，輔助判斷機體的免疫功能狀態(tài)。

不同指標檢測靈敏度：

注：若檢測結(jié)果超出檢測范圍，應用標準品/樣品/微球稀釋液將樣本稀釋適當?shù)谋稊?shù)重新檢測；若待測樣本的檢測結(jié)果低于檢測下限或未檢測到，建議直接報告為≤最低檢測值。

模版建立方法：

1、微球群分布：

注：微球內(nèi)部用不同強度的熒光染料染色。

2、模板建立可參考：
(1)建立X軸為FSC-H,Y軸為FSC-A的密度圖模板，設定門，不包含碎片和黏連的微球，如下圖1，P6；
(2)建立X軸為FSC-H、Y軸為SSC-H的線性密度圖模板，設定混合微球位置R1,R2,R3，如下圖2；
(3)建議兩個PE（X軸）和APC(Y軸)的對數(shù)密度圖模板，分別顯示R1門，R2門，R3門內(nèi)微球，使得微球群能夠清楚和明顯的分布于散點圖上，顯示各因子PE熒光強度。如圖3，圖4，圖5。

3、樣品的檢測結(jié)果分析
各標準品及樣本依次上機檢測，對于每種微球群，應最少獲取100個微球。利用標準品梯度作標曲，計算樣本檢測結(jié)果。

CBA應用領域：

• 炎癥因子的水平的分析
• 腫瘤研究及腫瘤疾病的輔助診斷、療效和預后監(jiān)測
• 系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）和新生兒膿血癥等免疫疾病的監(jiān)控
• 干細胞研究和干細胞治療監(jiān)測
• 免疫學研究和免疫疾病的輔助診斷和監(jiān)控
• 感染疾病的研究及輔助診斷和療效評價
• 免疫功能監(jiān)測
• 藥效評價，藥物研發(fā)、疫苗研究

CBA與傳統(tǒng)的蛋白定量相比有以下優(yōu)勢：
1、微量檢測: 一個樣本同時檢測多個因子，只需25ul。
2、數(shù)據(jù)更可靠: 多指標來源于同一樣本
3、檢測速度快：多因子同時檢測，無需過夜孵育。
4、靈敏度高：低至1.22pg/mL。

Absin CBA盒子優(yōu)點：
1、性能好：采用Biotin-SAV信號放大系統(tǒng)，靈敏度更高。
2、磁性微球: 搭配磁標板，操作簡單。
3、適用廣：與多種流式細胞儀兼容。
4、易分析：免費提供FCAP v3.0分析軟件。
5、指標靈活：檢測指標可靈活組合。

可自由組合的多因子檢測Kit：

Absin現(xiàn)有Kit

在試劑盒現(xiàn)有指標的基礎上，可以選擇個別指標進行組合，形成更少指標的盒子（比如四項或者五項細胞因子）但是human和mouse指標不通用�？陕�(lián)系業(yè)務人員咨詢組合Kit價格和貨期。