ELISA實(shí)驗(yàn)中基質(zhì)效應(yīng)知識(shí)

 基質(zhì)指的是樣品中除分析物以外的組分，由于基質(zhì)常常對(duì)分析物的分析過(guò)程有顯著的干擾，并影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性，這些影響和干擾被稱(chēng)為基質(zhì)效應(yīng)(matrix effect)。最常用的去除基質(zhì)效應(yīng)的方法是，通過(guò)已知分析物濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品，同時(shí)盡可能保持樣品中基質(zhì)不變，建立一個(gè)校正曲線(calibration curve)�；�質(zhì)效應(yīng)的影響是ELISA試劑盒開(kāi)發(fā)和使用中需要避開(kāi)的雷。
1、 如何避免ELISA實(shí)驗(yàn)中基質(zhì)效應(yīng)
 在ELISA實(shí)驗(yàn)中，偶爾會(huì)遇到樣品濃度挨近試劑盒的靈敏度就容易發(fā)生樣本OD450值低于空白值的現(xiàn)象，特別是在血清和血漿樣本中。這就有可能是基質(zhì)效應(yīng)導(dǎo)致的結(jié)果。
  
2、 如何判斷是否是基質(zhì)效應(yīng)呢？
    當(dāng)單個(gè)樣本或少量樣本值低于空白值時(shí)，可能是實(shí)驗(yàn)操作出現(xiàn)問(wèn)題，這時(shí)應(yīng)增加重復(fù)，進(jìn)步操作技術(shù)。當(dāng)許多樣本都低于空白值時(shí)，應(yīng)思考基質(zhì)效應(yīng)的影響，建立校正曲線予以修改�；�質(zhì)效應(yīng)的原因錯(cuò)綜復(fù)雜，有可能是樣品中存在的基質(zhì)導(dǎo)致原抗體的聯(lián)絡(luò)結(jié)合能力下降，便產(chǎn)生了樣本值低于空白值的現(xiàn)象。導(dǎo)致樣本值無(wú)法計(jì)算出數(shù)值，或許數(shù)值為負(fù)。
    雖然原因復(fù)雜，但有方法可以用來(lái)評(píng)估基質(zhì)效應(yīng)。
    第一種方法是采用線性稀釋?zhuān)�一般�?lái)講，抗原和捕獲抗體、檢測(cè)抗體之間的結(jié)合作用很強(qiáng)，樣品濃度被稀釋并不影響它們的結(jié)合，而造成基質(zhì)效應(yīng)的非特異結(jié)合的力要弱很多，如果不斷稀釋樣品，非特異結(jié)合造成的干擾會(huì)逐步減少，測(cè)量值也更接近真實(shí)值。沒(méi)有基質(zhì)效應(yīng)時(shí)，無(wú)論如何稀釋?zhuān)瑴y(cè)量值都和真實(shí)值吻合。而有基質(zhì)效應(yīng)時(shí)，稀釋會(huì)造成非特異性結(jié)合比例的減少，測(cè)量值也相應(yīng)地產(chǎn)生很大改變。
    第二種方法是摻入回收率實(shí)驗(yàn)，將低、中和高濃度的分析物摻入到已測(cè)定過(guò)濃度的樣本中，摻入前后實(shí)測(cè)到的濃度增加部分與摻入濃度之比就是回收率，回收率以百分比的形式呈現(xiàn)。回收率介于80-120%，才符合標(biāo)準(zhǔn)。

3、  那我們?nèi)绾伪苊釫LISA實(shí)驗(yàn)中基質(zhì)效應(yīng)？
    基質(zhì)效應(yīng)可以通過(guò)產(chǎn)品研發(fā)階段的優(yōu)化盡可能去消除的。針對(duì)ELISA產(chǎn)品研發(fā)進(jìn)行了多種優(yōu)化。ELISA試劑盒在開(kāi)發(fā)進(jìn)程中，標(biāo)準(zhǔn)品不選用人或動(dòng)物血清、血漿作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的稀釋液，只能選用其仿照物。我們量身定制的緩沖液系統(tǒng)，這些優(yōu)化后的緩沖液體系能很好消除基質(zhì)效應(yīng)。還有當(dāng)檢測(cè)某個(gè)分析物時(shí)，其他相關(guān)因子或類(lèi)似結(jié)構(gòu)因子如果有非特異性結(jié)合，也會(huì)導(dǎo)致基質(zhì)效應(yīng)，我們也因此做了大量的交叉反應(yīng)，確保沒(méi)有明顯的交叉反應(yīng)和干擾。而且我們?cè)噭┖斜仨毻ㄟ^(guò)嚴(yán)格的基質(zhì)效應(yīng)測(cè)試，全部包括線性稀釋和摻入回收率實(shí)驗(yàn)，并把測(cè)試結(jié)果記錄在說(shuō)明書(shū)中。