Masson 三色染色操作步驟說明

實驗原理：
Masson 三色染色又稱馬松染色，是結(jié)締組織染色中最經(jīng)典的一種方法，是膠原 纖維染色權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。所謂三色染色通常是指染胞核和能選擇性的顯示膠原纖維和肌纖維。該法染色原理與陰離子染料分子的大小和組織的滲透有關(guān)：分子的大小由分子量來體現(xiàn)，小分子量易穿透結(jié)構(gòu)致密、滲透 性低的組織，而大分子量則只能進入結(jié)構(gòu)疏松的、滲透性高的組織。然而，淡綠或苯胺藍的分子量很大，因此 Masson 染色后肌纖維呈紅色，膠原纖維呈綠色或藍色，主要用于區(qū)分膠原纖維和肌纖維。

操作步驟（僅供參考）：
1、 切片常規(guī)脫蠟至水。
2、 用配制好的 Weigert 鐵蘇木素染色液染色 5min-10min。
3、 酸性乙醇分化液分化 5-15s，水洗。
4、 Masson 藍化液返藍 3-5min，水洗。
5、 蒸餾水洗 1min。
6、 麗春紅品紅染色液染色 5-10min。
7、 在上述操作過程中按蒸餾水：弱酸溶液=2:1 比例配置弱酸工作液，用弱酸工作液洗 1min。
8、 磷鉬酸溶液洗 1-2min
9、 用配置好的弱酸工作液洗 1min。
10、直接放入苯胺藍染色液中染色 1-2min。
11、用配置好的弱酸工作液洗 1min。
12、95%乙醇快速脫水。
13、無水乙醇脫水 3 次，每次 5-10s。
14、二甲苯透明 3 次，每次 1-2min。
15、中性樹膠封固。
染色結(jié)果： 細胞核、膠原纖維/蛋白呈藍色
細胞漿、肌肉、紅細胞呈紅色

注意事項：
1、 切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。
2、 取 A1、A2 等量混合，成為 Weigert 鐵蘇木素染色液，一般 24h 失去
染色能力。
3、 組織固定起著非常重要的作用，使用不同的固定液可延長或縮短染色 時間。
4、 經(jīng)典 masson 三色染色中，用 Harris 蘇木精染核，但 Harris 蘇木精染核 后切片顏色不夠鮮艷，本染液采 用 Weigert 染細胞核，因為染色的目的主要在于區(qū)分膠原纖維和肌纖維，一般也可以省略該染色步驟。
5、 酸性乙醇分化時間應(yīng)該依據(jù)切片薄厚，組織的類別和新舊而定。
6、 弱酸溶液可使色彩更清晰鮮艷，如使用量大可自行配置 0.1-0.3%乙酸溶液 予以替代。
7、 磷鉬酸分化時要在鏡下控制，分化到膠原纖維呈淡紅色、纖維呈紅色即可。分化時間根據(jù)染色深淺而定， 一般 1-2min。
8、 Masson 藍化液亦可自行配制 Scoot 促藍液或 0.1-1%碳酸鋰水溶液予以替代。
9、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。