采用雙色熒光探針檢測(cè)PDX人源細(xì)胞比例

PDX模型(人源腫瘤異種移植型，Patient-DerivedtumorXenograft，PDX)是將從癌癥患者身上手術(shù)切除的小塊腫瘤植入高度免疫缺陷的小鼠體內(nèi)，腫瘤生長(zhǎng)，隨后移植到次級(jí)受體小鼠體內(nèi)。目前PDX免疫缺陷小鼠品系主要包括四種：Nude mice、SCID、NOD-SCID、NSG小鼠小鼠，這些小鼠均是免疫缺陷小鼠，缺乏功能性T細(xì)胞和/或B細(xì)胞的重度聯(lián)合免疫缺陷小鼠。由于是直接來(lái)源于患者的腫瘤組織，這種模型保存了患者自身的特殊表征，保留了腫瘤的微環(huán)境，能夠再現(xiàn)細(xì)胞系系統(tǒng)未能捕獲的腫瘤異質(zhì)性，是癌癥機(jī)制研究和藥物測(cè)試的有用工具。腫瘤開始生長(zhǎng)，之后可以取一部分腫瘤組織進(jìn)行基因測(cè)序分析，包括外顯子測(cè)序、RNA測(cè)序、轉(zhuǎn)錄組測(cè)序等，有可能篩選和識(shí)別出對(duì)患者腫瘤有效的藥物。

但隨著傳代次數(shù)增加，腫瘤組織保真度下降。翼和生物PDX模型質(zhì)控檢測(cè)采用雙色熒光探針，雙標(biāo)準(zhǔn)曲線絕對(duì)定量qPCR方法檢測(cè)PDX模型中人/小鼠細(xì)胞的比例，從而快速、高效判斷PDX模型中小鼠細(xì)胞的浸潤(rùn)狀態(tài)。

人與小鼠的雙標(biāo)準(zhǔn)曲線中，隨著PCR反應(yīng)體系中模板總濃度的變化，lg樣本量與Ct值均成線性關(guān)系，線性范圍寬。

每批次檢測(cè)，均繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，三個(gè)陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品分別3次技術(shù)重復(fù)，繪制散點(diǎn)圖并添加線性擬合趨勢(shì)線，獲得回歸方程，用于小鼠細(xì)胞浸潤(rùn)比例的計(jì)算。試劑盒中包含小鼠DNA和人源DNA混合陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品，圖中陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品分別對(duì)應(yīng)小鼠DNA含量為20%、50%和80%。
 
檢測(cè)方法有靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作方便、穩(wěn)定可靠的優(yōu)勢(shì)，適合PDX人源比例檢測(cè)的多種應(yīng)用場(chǎng)景。